ОДЕРЖАННЯ МУТАЦІЙ У ADE2 ГЕНІ З ВИКОРИСТАННЯМ CRISPR-CAS9 СИСТЕМИ У ФЛАВІНОГЕННИХ ДРІЖДІВ CANDIDA FAMATA

Анотація

Система CRISPR-Cas9 є одним із механізмів захисту деяких бактерій і більшості архей від чужорідної ДНК, наприклад, від плазмід і фагів. CRISPR-Cas9 система пригнічує інфікування фагами, трансформацію та кон’югацію шляхом руйнування чужорідної ДНК, яка потрапила в клітину. Цю систему було оптимізовано й адаптовано для лабораторного застосування як універсальний інструмент редагування геному. На сьогодні CRISPR-Cas9 система широко використовується у генетичній інженерії бактерій, грибів, рослин, тварин чи людських клітинних ліній. Порівняно з іншими, цей метод є відносно легким і швидким. Рибофлавін (вітамін В2) відіграє ключову роль в обміні речовин усіх живих організмів. У даний час біотехнологічний синтез є основним способом отримання рибофлавіну. Дріжджі C. famata мають великий промисловий потенціал як продуценти рибофлавіну та його похідних. Деякі мутанти цього виду дріжджів є найбільш флавіногенними серед усіх відомих організмів. Проте альтернативний генетичний код, низька частота гомологічної рекомбінації та невелика кількість селективних маркерів обмежують можливості генетичної інженерії цього виду дріжджів. У цій роботі CRISPR-Cas9 система, адаптована для дріжджів Candida albicans з альтернативним генетичним кодом, була успішно застосована для отримання мутацій у гені ADE2 флавіногенних дріжджів C. famata.