ЕФЕКТИВНІСТЬ ДНК ІНТЕГРАЦІЇ ТА ВИЖИВАНІСТЬ ЗИГОТ МИШЕЙ ЗА УМОВ ПРОНУКЛЕАРНОЇ МІКРОІН’ЄКЦІЇ
Анотація
Застосуванням методу мікроін’єкції у пронуклеус зигот мишей було продемонстровано, що трансгенна конструкція, яка містить ген LOC 78634, що кодує спермальний білок на акросомальній частині сперматозоїда, здатна інтегруватись у геном реципієнта з достатнім рівнем трансгенної експресії. Мікроін’єкції 2 і 4 пкл розчину ДНК, що містить 5,4 нг/мкл екзогенної ДНК, як і введення ТЕ буфера, знижує життєздатність зигот, однак нижча концентрація розчину ДНК (2 пкл) зумовлює кращу здатність ембріонів мишей розвиватися до стадії бластоцисти поза організмом і забезпечує кращу плацентацію ін’єктованих зигот після ембріональної трансплантації, порівняно з ін’єкціями розчину ДНК з концентрацією 4 пкл (р<0,05). Рівень імплантації зигот після ін’єкції у пронуклеус трансгену у тій чи іншій концентрації був суттєво вищий за відсоток зигот, які досягнули стадії бластоцисти поза організмом: 36,7 % та 30 % за умов експерименту in vivo порівняно з 8,6 % і 5,7 % за умов in vitro, що доводить доцільність безпосередньої трансплантації ембріонів реципієнтові. Ефективність трансгенезу у групах становила 6,7 % та 3,3 % для концентрації екзогенної ДНК конструкції 2 і 4 пкл/мл, відповідно. Серед 20 народжених нащадків було ідентифіковано 3 трансгенні мишки (15 %), дві самки та один самець, що підтверджено електрофореграмою продуктів ампліфікації ПЛР-аналізу з ДНК тканин.
Повний текст:
PDFПосилання
Dzitsiuk V., Seba M. Transhenez u tvarynnytstvi – perspektyvy i problemy // Nauk.-tekhn. biul. In-tu biolohii tvaryn ta Derzh. n.-d. kontrol. in-tu vetpreparativ ta korm. dobavok. 2012. Vyp. 13. № 3/4. S. 420–423.
Zynoveva N. A., Volkova N. A., Bahyrov V. A., Brem H. Transhennye selskokhoziaistvennye zhyvotnye: sovremennoe sostoianye yssledovanyi y perspektyvy // ekolohycheskaia henetyka. 2015. T. KhIII. 5, № 2. S. 58–76.
Kadulyn S. H., Ermolkyn T. H., Andreeva L. E. Analyz peresadky mykroynetsyrovannykh zyhot pry poluchenyy transhennykh myshei // Ontohenez. 2006. T. 37. № 2. C. 1–6.
Kozykova L. V., Rosokhatskyi S. Y., Dushevskaia A. M., Andreeva L. E. Pattern ekspressyy reporternykh henov transhennykh embryonov domashnykh zhyvotnykh y ryb // Dostyzhenyia nauky y tekhnyky APK. 2010. № 5. S. 55–57.
Maksymenko O. H., Deikyn A. V., Khodarovych Yu. M., Heorhyev P. H. Yspolzovanye transhennykh zhyvotnykh v byotekhnolohyy: perspektyvy y problemy // Acta Naturae. 2013. T. 5. № 1(16). S. 33–47.
Manyatys T., Frych e., Sembruk Dzh. Metody henetycheskoi ynzheneryy. Molekuliarnoe klonyrovanye. K.: Myr, 1984. 479 s.
Nemudryi A. A., Valetdynova K. R., Medvedev S. R., Zakyian S. M. Systema redaktyrovanyia henomov TALEN y CRISPR/CAS – ynstrumenty otkrytyi // Acta Naturae. 2014. № 3 (22). T. 6. S. 20–42.
Nykytyn V. A. Metody vvedenyia veshchestv y orhanel v kletku v tekhnolohyiakh kletochnoi ynzheneryy // Tsytolohyia. 2007. T. 49. № 8. S. 631–641.
Novoe v klonyrovanyy DNK. Metody / pod red. D. Hlovera. M.: Myr, 1989. 368 s.
Brinster R. L., Chen H. Y., Trumbauer M. E. et al. Factor affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. Vol. 82. P. 4438–4442. https://doi.org/10.1073/pnas.82.13.4438
DeMayo J. L., Wang J., Liang D. et al. Genetically Engineered Mice by Pronuclear DNA microinjection // Curr. Protoc. Mouse Biol. 2012. Vol. 1. N 2. P. 245–262.
Hirabayashi M., Takahashi R., Ito K. et al. A comparative study on the integration of exogenous DNA into mouse, rat, rabbit and pig genomes // Exp. Anim. 2001. Vol. 50(2). P. 125–131. https://doi.org/10.1538/expanim.50.125
Ittner L. M., Gotz J. Pronuclear injection for the production of transgenic mice // Nature protocols. 2007. N 2. R. 1206–1215.
Korfanty J., Toma A., Wojtas A. et al. Identification of a new mouse sperm acrosome-associated protein // Reproduction. 2012. Vol. 143. P. 749–757. https://doi.org/10.1530/REP-11-0270
Madich A., Brown E., Pearson L. et al. Generation of chimeric mice: Comparison of the effects of holding conditions of blastocysts to Embryonic Stem cells injection // 65th AALAS meeting (poster 168/abstract). San-Antonio, TX, October 19–23rd, 2014.
Madich A., Brown E., Pearson L. et al. Comparative analysis of the injectability of in vivo derived Morulae reaching Blastocyst stage in KSOM or M15 // 12th ICTT meeting. Edinburgh. October 4-6th, 2014. P. 74.
Murakami M., Ideguchi S., Fahrudin M. et al. Influence of the DNA amount per microinjection on the development and EGFP expression in bovine embryos // Arch. Tierz., Dummerstorf. 2003. Vol. 46 (1). P. 25–30. https://doi.org/10.5194/aab-46-25-2003
Nguyen E. B., Westmuckett A. D., Moore K. L. SPACA7 is a novel male germ cell-specific protein localized to the sperm acrosome that is involved in fertilization in mice // Biol. Reprod. 2014. Vol. 90(1). P. 1–13. https://doi.org/10.1095/biolreprod.113.111831
Park J. S., Han Y. M., Lee C. S. et al. Improved development of DNA-injected bovine embryos co-cultured with mouse embryonic fibroblast cells // Anim. Reprod. Sci. 2000. Vol. 59. P. 13–22. https://doi.org/10.1016/S0378-4320(99)00095-0
Yang H., Wang H., Shivalila C. S. et al. One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering // Sell. 2013. Vol. 154(6). P. 1370–1379. https://doi.org/10.1016/j.cell.2013.08.022
DOI: http://dx.doi.org/10.30970/vlubs.2017.76.06
Посилання
- Поки немає зовнішніх посилань.
