Життєздатність ацинарних клітин підшлункової залози та рівень мембранного потенціалу мітохондрій за дії жовчевої кислоти TLC-S
Анотація
Для з’ясування механізму дії жовчевої кислоти TLC-S досліджено виживаність ацинарних клітин підшлункової залози і рівень мембранного потенціалу мітохондрій за використання різних субстратів окиснення. Досліди проводили на щурах-самцях лінії Вістар масою 250–300 г. Суспензію ізольованих ацинарних клітин підшлункової залози отримували за допомогою колагенази (тип IV, 0,2 мг/мл). Частка живих клітин після ізолювання становила > 90 %, що було оцінено за допомогою тесту з трипановим синім. Виживаність ацинарних клітин після тривалої інкубації у різних середовищах визначали за допомогою флуоресцентних барвників пропідій йодиду (0,5 мг/мл) та Hoechst 33258 (5 мг/мл). Мембранний потенціал мітохондрій реєстрували за додавання барвника TMRM (50 нмоль/л). Фотографували клітини інвертованим мікроскопом Olympus IX73 з цифровою камерою DP-74. Підрахунок забарвлених клітин і визначення інтенсивності флуоресценції TMRM здійснювали з використанням програмного забезпечення ImageJ. Встановлено, що наявність у середовищі TLC-S у концентрації 0,5 ммоль/л за використання як субстрату окиснення глюкози (10 ммоль/л), пірувату (2 ммоль/л) чи аланіну (2 ммоль/л) суттєво не впливало на частку живих клітин після 2 і 4 год інкубування. Коли ж до середовища додавали TLC-S у концентрації 2 ммоль/л, частка живих клітин значно зменшувалася. Це зменшення було найменшим за окиснення пірувату. За дії TLC-S (25 хв) у присутності лише глюкози мембранний потенціал мітохондрій зменшився на 9,8 % (P<0,05, n=3), у присутності аланіну (на тлі глюкози) – на 23,5 % (P<0,05, n=4). Коли ж до середовища додавали піруват (на тлі глюкози), мембранний потенціал мітохондрій під впливом TLC-S вірогідно не змінювався. Наведені результати дають змогу припустити про наявність кількох різних механізмів негативної дії TLC-S на ацинарні клітини підшлункової залози: за низьких концентрацій (або напочаткових етапах дії) в її основі лежить порушення реакції трансамінування аланіну, що призводить до порушення генерації мембранного потенціалу мітохондрій, а за високих – порушення цілісності плазматичної і/чи внутрішньоклітинних мембран.
Ключові слова
Повний текст:
PDFПосилання
Modlin I. M., Kidd M., Hults C., Hinoue T. Surgery of chronic pancreatitis: Chronicle of confusion and despair // World J. Surg. 2002. Vol. 26. P. 1382-1396. https://doi.org/10.1007/s00268-002-6422-5
Voronina S. G., Barrow S. L., Gerasimenko O. V. et al. Effects of secretagogues and bile acids on mitochondrial membrane potential of pancreatic acinar cells: comparison of different modes of evaluating DeltaPsim // J. Biol. Chem. 2004. Vol. 279 (26). P. 27327-27338. https://doi.org/10.1074/jbc.M311698200
Voronina S., Longbottom R., Sutton R. et al. Bile acids induce calcium signals in mouse pancreatic acinar cells: implications for bile-induced pancreatic pathology // J. Physiol. 2002. Vol. 540. P. 49-55. https://doi.org/10.1113/jphysiol.2002.017525
Voronina S. G., Barrow S. L., Simpson A. W. M. et al. Dynamic changes in cytosolic and mitochondrial ATP levels in pancreatic acinar cells // Gastroenterol. 2010. Vol. 138. P. 1976-1987. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2010.01.037
Booth D. M., Murphy J. A., Mukherjee R. et al. Reactive oxygen species induced by bile acid induce apoptosis and protect against necrosis in pancreatic acinar cells // Gastroenterol. 2011. Vol. 140. P. 2116-2125. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2011.02.054
Peng S., Gerasimenko J. V., Tsugorka T. M. et al. Galactose protects against cell damage in mouse models of acute pancreatitis // J. Clin. Invest. 2018. Vol. 128(9). P. 3769-3778. https://doi.org/10.1172/JCI94714
Williams J. A., Korc M., Dormer R. L. Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini // Am. J. Physiol. 1978. Vol. 235. P. 517-524. https://doi.org/10.1152/ajpendo.1978.235.5.E517
Tissue expression of GPT - Summary - The Human Protein Atlas. https://www.proteinatlas.org/ENSG00000167701-GPT/tissue
Zub A. M., Manko B. O., Manko V. V. Screening of amino acids as a safe energy source for isolated rat pancreatic acini. Preprint. https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-3153597/v1
Danielsson A., Sehlin J. Transport and oxidation of amino acids and glucose in the isolated exocrine mouse pancreas: effects of insulin and pancreozymin // Acta Physiologica Scandinavica. 1974. Vol. 91. P. 557-565. https://doi.org/10.1111/j.1748-1716.1974.tb05710.x
DOI: http://dx.doi.org/10.30970/vlubs.2023.89.09
Посилання
- Поки немає зовнішніх посилань.
