РОЗРОБКА ПЛАТФОРМИ ДЛЯ КОНСТРУЮВАННЯ НАДПРОДУЦЕНТІВ АМІНОРИБОФЛАВІНУ НА ОСНОВІ ФЛАВІНОГЕННИХ ДРІЖДЖІВ CANDIDA FAMATA

Анотація

Антибіотик розеофлавін і його біосинтетичний попередник амінорибофлавін (АФ) продукуються грампозитивними бактеріями Streptomyces davawensis і Streptomyces cinnabarinus. Особливо цікавим є АФ, оскільки він проявляє виражену антибіотичну дію щодо грампозитивних бактерій Staphyloccus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus та Micrococcus luteus і водночас не є токсичним для культур клітин ссавців. Одержання АФ у промислових масштабах шляхом конструювання мікробних надпродуцентів цього антибіотика має велику науково-практичну цінність. Для конструювання надпродуцентів АФ як вихідні організми доцільно використовувати наявні надпродуценти флавінмононуклеотиду (ФМН) та рибофлавіну (РФ), оскільки синтез АФ у клітині відбувається із ФМН, який, у свою чергу, утворюється із РФ. Мета даної роботи полягала в досягненні гетерологічної експресії ключового гена синтезу АФ rosB, що кодує 8-диметил-8-амінорибофлавін-5’-фосфатсинтетазу у штаму дріжджів Candida fаmata AF-4, що є надпродуцентом РФ. Для досягнення високого рівня експресії ген rosB було введено в геном реципієнта у складі плазміни під контролем сильного конститутивного промотора гена TEF1 Debaryomyces hansenii, що кодує фактор елонгації трансляції. Отримані трансформанти штаму AF4 стабілізували, а наявність касети експресії гена rosB в геномі реципієнта було підтверджено за допомогою ПЛР. Використаний підхід дає змогу експресувати гени біосинтезу АФ та розеофлавіну S. davawensis у дріжджових надпродуцентів РФ/ФМН C. famata з метою конструювання надсинтетиків цих антибіотиків.