ОКСИДАЗИ МІКРОСКОПІЧНИХ ГРИБІВ: СКРИНІНГ ШТАМІВ-ПРОДУЦЕНТІВ І ПЕРСПЕКТИВИ БІОАНАЛІТИЧНОГО ВИКОРИСТАННЯ

Анотація

Здійснено скринінг низки штамів мікроскопічних грибів на здатність до синтезу практично важливих оксидаз (галактозооксидази, гліцеролоксидази, метиламіноксидази та пероксидази). Відібрано ефективні штами роду Botrytis як потенційні продуценти гліцеролоксидази (ГО) та галактозооксидази (ГалО). Досліджено вплив різних джерел вуглецю й інших умов культивування на ефективність позаклітинного та внутрішньоклітинного накопичення ГО і ГалО. Розроблено оптимальну схему виділення й очищення ГО із клітин B. allii, яка включає колонкову хроматографію безклітинного екстракту на іонообмінному сорбенті DEAE–Toyopearl 650M. Отримано препарат ГО з активністю 0,4 Од./мг білка (фактор очищення 16,6, вихід 65 %). Продемонстровано можливість конструювання амперометричного мікробного біосенсора на гліцерол за використання пермеабілізованих клітин штаму B. аllii як біоселективного елемента. Максимальний відгук біосенсора на гліцерол 217 нА, константа Міхаеліса-Ментен 20 мМ. Виділений фермент і клітинний сенсор можуть бути перспективними для аналізу гліцеролу в реальних зразках.